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Protozooses transmises par l'alimentation (cryptosporidiose, giardose et toxoplasmose) : mode de contamination et pathogénie (PROTAL) - EA 3800


Coordonnées

UFR de Médecine
3ème étage, Bâtiment Recherche
1, rue du Maréchal Juin
51098 Reims Cedex
Tel: 03 26 91 81 63
Fax: 03 26 91 8164
ivillena@chu-reims.fr


Présentation
Le projet d’équipe repose sur un objectif thématique centré sur l’épidémiologie des souches de protozoaires pathogènes pour l’homme transmises par l’alimentation, selon deux approches de recherche complémentaires–
1. « Etude de la circulation dans l'environnement  des protozoaires pathogènes pour l’homme à transmission alimentaire/hydrique». Plusieurs objectifs sont menés en parallèle : i) détecter et caractériser les protozoaires les plus fréquemment impliqués dans les infections alimentaires ; ii) mieux appréhender les modalités de contamination de l'aliment (bioaccumulation et dépuration des mollusques bivalves et persistance des parasites sur des matrices végétales); iii) caractériser l'impact de la cuisson domestique sur la viabilité de ces parasites. Enfin, l’étude de la circulation de la forme oocyste dans le sol et l’eau permet de mieux appréhender la dynamique de la contamination environnementale par Toxoplasma gondii.
2.« Etude des pathogénicités des protozoaires à transmission alimentaire/hydrique : mise en évidence et mécanismes ».  Deux aspects de la pathogénicité de Toxoplasma gondii sont étudiés: i) l’implication de protéase(s) parasitaire(s) , ii) et la résistance des souches de Toxoplasma gondii aux anti-toxoplasmiques.

Directeur
Pr Isabelle Villena
03 26 91 81 63/ 03 26 91 81 64 / ivillena@chu-reims.fr

Effectif
L’équipe est composée par des Enseignants –Chercheurs de l’URCA, de l’Université de Rouen (labellisation bi-site) et de Maisons-Alfort (Ecole Véterinaire/ANSES).

Enseignants-chercheurs et Praticien Hospitalier
VILLENA Isabelle  (Directeur)  PU-PH   ivillena@chu-reims.fr
FAVENNEC Loïc (Co-directeur,Rouen) PU-PH   loic.favennec@chu-rouen.fr
AUBERT Dominique  MCU-PH   daubert@chu-reims.fr
GARGALA Gilles (Rouen)  MCUPH   gilles.gargala@chu-rouen.fr
JAUSSAUD Roland   PU-PH (chercheur associé) rjaussaud@chu-reims.fr

Enseignants-chercheurs
BOIREAU Pascal (USC, Maisons-Alfort) PU   pboireau@vet-alfort.fr
BLAGA Radu (USC, Maisons-Alfort)  MCU   rblaga@vet-alfort.fr
LEGOFF Laetitia (Rouen)  MCU   laetitia.legoff@univ-rouen.fr

Praticien Hospitalier
CHEMLA Cathy   PH   cchemla@chu-reims.fr
DUMANT Clémentine (Rouen) PH   clementine.dumant@chu-rouen.fr
FRANCOIS Arnaud (Rouen)  PH   arnaud.francois@chu-rouen.fr

IATOS
POULLE Marie-Lazarine  IGR   marielazarine.poulle@cerfe.com
ESCOTTE Sandie   IGE   sandie.escotte@univ-reims.fr
MILLIARD Violaine   IGE   violaine.milliard@univ-reims.fr
PERRET Catherine  (USC, Maisons-Alfort) IGE    cperret@vet-alfort.fr
THOMAS Myriam (USC, Maisons-Alfort) IGE    mthomas@vet-alfort.fr

Doctorants
MARTIN Anne-Pascaline     anne-pascale.bouleau@etudiant.univ-reims.fr
HOHWEYER Jeanne     jeanne.hohweyer@etudiant.univ-reims.fr
GOTTELAND Cécile     cecile.gotteland@ etudiant.univ-reims.fr
FORIN-WIART Marie-Amélie     ma.forin-wiart@cerfe.com
PALOS-LADEIRO Melissa     melissa.palosladeiro@ etudiant.univ-reims.fr
HALLIEZ Marie      marie.halliez@gmail.com

Mots clés
Protozoaires (Toxoplasma, Cryptosporidium et Giardia) – pathogénie- résistance médicamenteuse- virulence- protéases- protozooses alimentaires et environnementales
Thématiques de recherche
Mécanismes de résistance aux antiparasitaires
Transporteurs membranaires
Facteur de virulence (métallo-protéases)
Pathogénie
Parasites protozoaires dans l’alimentation et l’environnement.
Savoir faire
Culture cellulaire /parasitaire
Détection antigène/anticorps (western-blott…)
Biologie moléculaire (conventionnelle et en temps réel)
Purification de protéines
Cytométrie en flux
Electrophorèse bidimensionnelle
Immunoséparation par billes magnétiques
Filtration de gros volume pour séparation immunomagnétique de parasites dans l’eau
Equipements
Biologie moléculaire (PCR classique et PCR Temps réel)
Cultures cellulaires
Equipements spécifiques pour analyse antigènes-anticorps (électrophorèses bidimensionnelles, western-blott…) .

Brevets/ Contrats
- Contrat Plan Etat Région (CPER 2007-2013). Nous avons obtenu un financement en 2009 au titre du CPER 2007 demandé par le Pôle Santé de l’URCA, portant sur les « Métallo endopeptidases de Toxoplasma gondii : caractérisation des protéases par protéomique, rôle comme cible thérapeutique et essai d’inhibiteurs de synthèse. ».  Avec thèse d’Université sur cette thématique (Thèse en collaboration au sein de l’IFR53/SFR CAP-santé).
- Contrat sur AAP IBISA 2008-2009 : "Elaboration d’un logiciel de seconde génération de gestion de collections de souches et d’ADN de micro-organismes ». En collaboration avec C. Bizet (Institut Pasteur).
- Contrat N° ANR-09-ALIA-009-01 : programme PROTOFOOD (2010-2013). Contamination des mollusques bivalves et des végétaux par les protozoaires Cryptosporidium, Giardia et Toxoplasma : développement et validation d’une stratégie standardisée de détection et de caractérisation ; étude de la persistance sur/dans matrices et évaluation de l’impact de procédés ménagers de cuisson. (Porteur contrat I. Villena). 
- Contrat AFSSET/ADEME 2010-2013 : « L’animal, le sol, l’eau : dynamique de la contamination environnementale par la toxoplasmose ». (I. Villena, porteur associé).Collaboration avec l’équipe UMR CNRS 5558, Université de Lyon I (Pr Gilot).
- Contrat EC2CO 2011-2012 : Interactions PArasites - Dreissènes : implication en biosurveillance.  (Porteur contrat A. Geffard,   collaboration EA 3800). 

Partenariats
ACADEMIQUES
33 CHU dans le cadre du CNR de la Toxoplasmose et du CRB Toxoplasma
 
AUTRES
Institut de Veille Sanitaire (CNR Toxoplasmose)
Agence Nationale de Sécurité sanitaire alimentaire, Environnement et Santé au Travail (ANSES)

Echanges internationaux :
Convention Programme Européen EGIDE PHC PAVLE SAVIC 2010-2011 : échanges avec la Serbie et le Montenegro (Pr O. Djurkovic-Djakovic) pour caractérisation moléculaire de souches de T. gondii isolées en Serbie.
Convention Programme Européen EGIDE PHC 19579 WK 2010: échanges avec la Roumanie pour étude de la prévalence de la toxoplasmose chez les animaux de rente.

Spécificités
Expertises :
Laboratoire nommé Responsable national du Centre National de Référence sur la Toxoplasmose (nomination 2006-2011, renouvellement 2012- 2016).
Centre National de Référence de la Toxoplasmose (coordonnateur national : Pr. Isabelle)
Centre de Ressources Biologiques Toxoplasma (support Ministère de la Recherche et Inserm), CRB certifié selon la norme NF 96-900 depuis janvier 2010. Ce CRB est soutenu par le CHU et l’URCA et la Région Champagne-Ardenne.

L’EA 3800 intitulée « Interactions Cellules-Parasites : Biodiversité, Pathogénie, Résistance » a modifié son périmètre pour le nouveau plan quadriennal (2012-2016) vers le domaine des protozooses transmises par l’alimentation. La labellisation de notre équipe par l’AERES a permis l’intégration d’enseignants chercheurs de l’Université de Rouen permettant d’élargir nos champs de compétences. L’EA assure ainsi des recherches centrées sur l’épidémiologie de ces affections mais également sur la pathogénie et la résistance des 3 protozoaires d’intérêt (Cryptosporidium, Giardia et Toxoplasma).

L’EA3800 participe en outre à l’intégration à l’Université de Reims Champagne Ardenne de la Plate-forme du CERFE (Centre de Recherche et de Formation en Eco-éthologie). Cette participation permet un apport en matière d’éco-éthologie et une aide à la compréhension de la dynamique du cycle de la toxoplasmose. L’Université a choisi de promouvoir cette plate-forme originale (unique en France et reconnue au niveau national/européen) en intégrant un des 2 chercheurs présents à notre EA (ML Poulle). 

L’USC Epitoxo permet un rapprochement des compétences dans le domaine humain et vétérinaire qui doit conduire notre nouvelle équipe à se positionner sur le plan européen dans le domaine de recherche sur les zoonoses transmises par l’alimentation. Cette USC est en interface avec l’Unité de recherche BIPAR (direction J. Guillot, P. Boireau, ANSES-LERPAZ, Maison Alfort) et regroupe du personnel de l’EA 3800 et de l’Unité de BIPAR.

La création de notre nouvelle EA dégage des synergies thématiques, opérationnelles et méthodologiques avec plusieurs axes :
1: Etude de la circulation dans l'environnement  des protozoaires parasites de l’homme à transmission alimentaire/hydrique  (différents programmes de recherche : AFSSET 2006-2009, ADEME2009-2013, ANR ALIA).
2 : Etude des pathogénicités des protozoaires à transmission alimentaire/hydrique : mise en évidence et mécanismes avec un centrage à Reims sur Toxoplasma soutenu par différents programmes dont le Contrat Plan Etat Région  2007-13.

Principales Publications (2009-2012)

SCHMID A., SAUVAGE V., ESCOTTE-BINET S., AUBERT D., TERRYN C., GARNOTEL R., VILLENA I. Molecular characterization and expression analysis of a P-glycoprotein homologue in Toxoplasma gondii. Mol. Biochem. Parasitol., 2009, 163, 54-60.
GILOT-FROMONT E., AUBERT D., BELKILANI S., HERMITTE P., GIBOUT O., GEERS R., VILLENA I. Landscape, herd management and within-herd seroprevalence of Toxoplasma gondii in beef cattle herds from Champagne-Ardenne, France. Vet. Parasitol., 2009, 161, 36-40. 
AJZENBERG D., YERA H., MARTY P., PARIS L., DALLE F., MENOTTI J., AUBERT D., FRANCK J., BESSIERES M.H., QUINIO D., PELLOUX H., DELHAES L., DESBOIS N., THULLIEZ P., ROBERT-GANGNEUX F., KAUFFMANN-LACROIX C., PUJOL S., RABODONIRINA M., BOUGNOUX M.E., CUISENIER B., DUHAMEL C., HAI DUONG T., CARME B., BONNABAU H., DARDÉ M.L., VILLENA I. Genotype of 88 Toxoplasma gondii isolates associated with toxoplasmosis in immunocompromised patients and correlation with clinical findings. J. Infect. Dis., 2009, 199, 1-13.
AUBERT D., VILLENA I. Detection of Toxoplasma gondii oocysts in water: proposition of a strategy and evaluation in Champagne-Ardenne region, France. Mem. I. Oswaldo. Cruz., 2009, 104, 290-5.
RICHOMME C., AUBERT D., GILOT-FROMONT E., AJZENBERG D., MERCIER A., DUCROT C., FERTÉ H., DELORME D., VILLENA I. Genetic characterization of Toxoplasma gondii from wild boar (Sus scrofa) in France. Vet. Parasitol., 2009, 164, 296-300.
SAUVAGE V., AUBERT D., ESCOTTE-BINET S., VILLENA I. The role of ATP-Binding cassette (ABC) proteins in protozoan parasites. Mol. Biochem. Parasitol., 2009, 167, 81-94.
HALOS L., THÉBAULT A., AUBERT D., THOMAS M., PERRET C., GEERS R., ALLIOT A., ESCOTTE-BINET S., AJZENBERG D., DARDÉ M.L., DURAND B., BOIREAU P., VILLENA I. An innovative survey underlining the significant level of contamination by Toxoplasma gondii of ovine meat consumed in France. Int. J. Parasitol., 2010, 40, 193-200.
VILLENA I, ANCELLE T., DELMAS C., GARCIA P., BRÉZIN A.P., THULLIEZ P., WALLON M., KING L., GOULET V., Toxosurv network and National Reference Centre for Toxoplasmosis. Congenital Toxoplasmosis in France in 2007: first results from a national surveillance system. EuroSurveillance, 2010, 15, 14-9.
AUBERT D., AJZENBERG D., RICHOMME C., GILOT-FROMONT E., TERRIER M.E., DE GEVIGNEY C., GAME Y., MAILLARD D., GIBERT P., DARDE M.L., VILLENA I. Molecular and biological characteristics of Toxoplasma gondii isolates from wildlife in France. Vet. Parasitol. 2010, 171, 346-9.
The ANOFEL Cryptosporidium National Network (VILLENA I., AUBERT D.). Laboratory-based surveillance for Cryptosporidium in France, 2006-2009. Eurosurveillance, 2010, 19;15(33):19642.
ALVARADO-ESQUIVEL C., RAJENDRAN C., FERREIRA L.R., KWOK O.C.H., CHOUDHARY S., ALVARADO-ESQUIVEL D., RODRIGUEZ-PENA S., VILLENA I., DUBEY J.P. Prevalence of Toxoplasma gondii infection in wild birds in Durango, Mexico. J. Parasitol., 2011, 97, 809-12.
ALVARADO-ESQUIVEL C., GARCÍA-MACHADO C., ALVARADO-ESQUIVEL D., GONZÁLEZ-SALAZAR A.M., BRIONES-FRAIRE C., VITELA-CORRALES J., VILLENA I., DUBEY J.P. Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in domestic pigs in Durango State, Mexico. J. Parasitol., 2011, 97, 616-9.
DUBEY J.P., RAJENDRAN C., FERREIRA L.R., MARTINS J., KWOK O.C., HILL D.E., VILLENA I., ZHOU H., SU C., JONES J.L. High prevalence and genotypes of Toxoplasma gondii isolated from goats, from a retail meat store, destined for human consumption in the USA. Int. J. Parasitol., 2011, 41, 827-33.
ALVARADO-ESQUIVEL C., GARCIA-MACHADO C., VITELA-CORRALES J., VILLENA I., DUBEY J.P. Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in domestic goats in Durago State, Mexico. Vet. Parasitol., 2011, 183, 43-6.
LELU M., GILOT-FROMONT E., AUBERT D., RICHAUME A., AFONSO E., DUPUIS E., GOTTELAND C., MARNEF F., POULLE M.L.. DUMETRE A., THULLIEZ P., DARDE M.L., VILLENA I. Development of a sensitive method for Toxoplasma gondii oocyst extraction in soil. Vet. Parasitol., 2011, 183, 59-67.
VUJANIC M., IVOVIC V., KATARANOVSKI M., NIKOLIC A., BOBIC B., KLUN I., VILLENA I., KATARANOVSKI D., DJURKOVIC-DJAKOVIC O. Toxoplasmosis in naturally infected rodents in Belgrade, Serbia. Vector Borne Zoonotic Dis., 2011, 8, 1209-11.
WALLON M., KIEFFER F., BINQUET C., THULLIEZ P., GARCIA-MÉRIC P., DUREAU P., FRANCK J., PEYRON F., BONNIN A., VILLENA I. BONITHON-KOPP C., GOUYON J.B., MASSON S., FÉLIN A., CORNU C. Toxoplasmose congénitale : comparaison randomisée de stratégies de prévention des rétinochoroïdites. Thérapie, 2011, 66, 473-80.
VILLENA I., DURAND B., AUBERT D., BIAGA R., GEERS R., THOMAS M., PERRET C., ALLIOT A., ESCOTTE-BINET S., THEBAULT A., BOIREAU P., HALOS L. New strategy for the survey of Toxoplasma gondii in meat for human consumption. Vet. Parasitol., 2012, 183, 203-8.
DUMETRE A., AUBERT D., PUECH PH., HOHWEYER J., AZAS N., VILLENA I. Interaction forces drive the environmental transmission of pathogenic protozoa. Appl. Environ. Microbiol., 2012, 78, 905-12.
ALVARADO-ESQUIVEL C., GARCIA-MACHADO C., ALVARAO-ESQUIVEL D., VITELA-CORRALES J., VILLENA I., DUBEY J.P. Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in domestic sheep in Durango State, Mexico. J. Parasitol., 2012, 98, 271-3.
ALVARADO-ESQUIVEL C., GONZALEZ-SALAZAR A., ALVARADO-ESQUIVEL D., ONTIVEROS-VASQUEZ F., VITELA-CORRALES J., VILLENA I., DUBEY J.P. Seroprevalence of Toxoplasmi gondii infection in chickens in Durango state, Mexico. J. Parasitol., 2012, 431-2.
LELU M., VILLENA I., DARDE ML., AUBERT D., GEERS R., DUPUIS E., MARNEF F., POULLE ML., GOTTELAND C., DUMETRE A., GILOT-FROMONT E. Quantitative estimation of the viability 1 of Toxoplasma gondii oocysts in soil. Appl. Environ. Microbiol, 2012, 78, 5127-32.
GROH M., FAUSSART A., VILLENA I., AJZENBERG D., CARME B., DEMAR M., JOLY V., HOUZE S., SIMON S., AUBERT D., CHARLOIS-OU C., YENI P. Acute lung, hear, liver and pancreatic involvements with hyponatremia and retinochoroiditis in a 33-year-old french guianan patient. PLoS Negl. Trop. Dis., 2012, 6 (10):e1802.
DOLIWA C., ESCOTTE-BINET S., AUBERT D., VELARD F., SCHMID A., GEERS R., VILLENA I. Induction of sulfadiazine resistance in vitro in Toxoplasma gondii. Exp. Parasitol.,  2013, 133, 131-6.
PALOS LADEIRO M., BIGOT A., AUBERT D., HOHWEYER J., FAVENNEC L., VILLENA I., GEFFARD A. Protozoa interaction with aquatic invertebrate : interest for watercourses biomonitoring. Environ. Sci. Pollut. Res. Int., 2013, 20, 778-89.
DOLIWA C., XIA D., ESCOTTE-BINET S., NEWSHAM EL., SANDERSON SJ., AUBERT D., RANDLE N., WASTLING JM., VILLENA I. Identification of differentially expressed proteins in sulfadiazine resistant and sensitive strains of Toxoplasma gondii using difference-gel electrophoresis (DIGE). Int. J. Parasitol.,Drugs and Dug Resistance 2013, 35-44.
 

ISABELLE VILLENA
Directrice
Tél 03.26.91.80.86

Equipe

DOMINIQUE AUBERT
ROLAND JAUSSAUD
Chercheur associé
MARIE-LAZARINE POULLE
SANDIE ESCOTTE
ANNE-PASCALINE BOULEAU
JEANNE HOHWEYER
CECILE GOTTELAND
MARIE-AMELIE FORIN-WIART